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1、第11届李曼养猪大会交流报告十三五国家重点研发计划项目:2018YFD05008;湖北省重点研发计划:2021BBA085猪伪狂犬病的综合防控与净化报告人:吴 斌华中农业大学动物医学院动物传染病教研室2022年11月目录猪伪狂犬病的特点01猪伪狂犬病的净化04猪伪狂犬病的综合防控03猪伪狂犬病流行现状02PART 01猪伪狂犬病的特点伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)PRV为疱疹病毒科疱疹病毒属,能够感染多种动物,主要导致猪伪狂犬病,以脑脊髓炎、呼吸道疾病和种猪繁殖障碍为特征,可感染各个日龄的猪群,广泛分布于全球;1990s 后,我国通过免疫控制了PRV流行,但201
2、1年底再次爆发疫情,给养猪业带来重大经济损失,我国曾将其列为二类动物疫病,已明确列入种猪需净化疾病。Mettenleiter T C.Pseudorabies Virus.Encyclopedia of Virology,2008.Guosong Wang et al.NatureCommunications,2022.伪狂犬病世界范围内的流行现状,WOAH,2022/10猪伪狂犬病的特点PRV的免疫学特点:体液免疫、细胞免疫、局部免疫;免疫保护期PRV的流行病学特点:多种动物可感染或带毒;多种传播途径传播;猪可建立潜伏感染,终生带毒并间断性排毒;猪感染后的临床特点:仔猪;保育猪;生长育肥猪;
3、种猪(公猪、妊娠母猪、哺乳母猪、后备种猪)PRV病毒的致病性与重要毒力相关基因基因名称主要功能备注TK基因在神经细胞中的增殖并产生感染性粒子主要毒力相关基因gG基因趋化因子抑制作用趋化因子结合蛋白gE基因病毒在神经中传递有关病毒增殖非必需基因RR基因急性感染和潜伏感染中起关键作用gB基因免疫原性基因抗体检测靶标蛋白gC基因免疫原性基因病毒入侵所必须gD基因病毒入侵;保守性强PCR诊断的靶蛋白猪伪狂犬病的特点伪狂犬病在中国的两次大流行:通过遗传进化分析,变异毒株处于独立的基因型进化分支。研究表明变异毒株的 gC、gE等多抗原位点发生变异,免疫原性增强,毒力增强。通过对毒株的表型和毒力测定表明,与
4、早期基因型毒株相比,近年来PRV毒株毒力不断增强,对猪群的致病性不断增加。伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)Wong G et al.EMI,2019 PRV再次大规模爆发后不断发生变异,出现新的基因型;陆续有研究表明发现变异毒株与疫苗毒株发生同源重组现象;2017-2022年期间,中国已报道26例PRV感染人的临床病例,表现出严重的神经系统损伤及后遗症,严重危害公共卫生安全。Viruses,2021PART 02猪伪狂犬病流行情况2011-2021年猪场PRV-gB/gE抗体阳性检出率gB抗体阳性检出率gE抗体阳性检出率Unpublished data2012-20
5、21年猪场PRV野毒抗原及抗体阳性检出率Unpublished data流行毒株出现毒力增强现象,导致中大猪出现严重呼吸道症状,甚至死亡猪伪狂犬病的流行情况Unpublished data病例复制结果显示新毒株对12周龄肥猪致病率100%猪伪狂犬病的流行情况剖检观察到典型PRV病变:脑组织出血、肝脏白色梗死灶、肺脏出血水肿、扁桃体化脓坏死Unpublished data病例复制结果显示新毒株与其他毒株相比对肥猪致病性更强猪伪狂犬病的流行情况强毒组肥猪体温升高值、口鼻肛门排毒、病毒血症、ELISA抗体及组织病毒载量等情况均高于其他组Unpublished data猪场PRV分离情况猪场病料类型2
6、019-2022年临床送检典型阳性样品在PK-15细胞上的平均病毒分离率为85%,毒价在10-5.94 10-7.49之间。毒株分离率高的样品主要是有呼吸道症状的仔猪肺脏和淋巴结样品。gC基因遗传进化分析表明分离株全部属于基因型毒株。Unpublished data病毒分子流行病学山东3福建1江西3安徽1湖北12广西1上海1内蒙古1甘肃1江苏3北京1浙江4湖南2河南8广东345株PRV变异毒株来源于15个省份,以湖北、河南为主。45株伪狂犬病病毒临床毒株(20122017年分离株)的全基因组重测序Viruses,2021病毒分子流行病学45株伪狂犬病病毒临床毒株的全基因组重测序 45株PRV基
7、因组中存在较多的变异区域Viruses,2021病毒分子流行病学45株伪狂犬病病毒临床毒株的全基因组重测序 PRV遗传进化分析显示主要分为2个主要的基因型:所有的中国分离株位于基因型,而国外分离株全部位于基因型。Viruses,2021病毒分子流行病学45株伪狂犬病病毒临床毒株的全基因组重测序 PRV间存在较强的同源重组现象Viruses,2021病毒分子流行病学 2019年首次从患者脑脊液中分离得到一株PRV hSD-1/2019,为PRV向人群的跨种传播提供了直接有力的病毒分离证据。生物学特性及基因组分析发现,hSD-1/2019毒株与我国猪群中当前流行的PRV变异毒株高度相似。分离得到人
8、源PRV毒株 hSD-1/2019病例1的病毒载量及抗体变化基于基因组和gC基因的系统进化树分析Liu Q et al.Clinical infectious diseases,2020病毒分子流行病学2020年在屠宰场分离到1株病毒:疫苗毒与野毒的重组毒 gC基因遗传进化分析显示重组毒处于独立的2.2分支,全基因组中有多处疫苗毒和野毒重组事件Unpublished data病毒分子流行病学 重组毒的高免血清对其他类型的毒株都有较强的中和能力2020年在屠宰场分离到1株病毒:疫苗毒与野毒的重组毒Unpublished data病毒分子流行病学PRV毒株信息数据库(120余株)。http:/:8
9、080/PRV/PART 03猪伪狂犬病的检测与防控猪伪狂犬病的实验室诊断病原学诊断猪伪狂犬病的实验室诊断免疫学诊断猪伪狂犬病的防控当前临床防控猪伪狂犬病面临的问题免疫程序的制定与优化生物安全体系与饲养管理当前中国猪伪狂犬病的控制思路当前临床防控猪伪狂犬病面临的问题PR在国内仍有一定流行率,野毒感染猪群广泛存在;商品猪群未免疫或免疫不足,导致病毒在中大猪群中大量增殖,使种猪、仔猪等易感猪感染;由于ASFV防控需要,部分猪场猪群伪狂犬病免疫减少,产生免疫空白;传播途径多:接触传播、胎盘传播,精液传播,野生动物或媒介传播。筛选合适的疫苗,制定合理的免疫程序建议免疫程序(依感染风险评估调整)种猪:“
10、3+2免疫程序”,即一年普免3次活疫苗,每胎产前免疫灭活疫苗(首次灭活疫苗应免疫2次,间隔4周);后备:配种前8周龄一次免活疫苗;配种前4周灭活苗加强免疫;产前4周灭活疫苗免疫,以后按生产母猪免疫程序。仔猪:“2+1+1免疫程序”0日龄和45日龄活疫苗;90-95日龄灭活苗;(生产周期6-7月以上猪群在140日龄加强免疫一针活苗),种用猪120130日龄免疫活苗。生物安全体系与饲养管理育种+生物安全+饲养管理健康/疾病防重于治:1)规范猪场的生物安全措施人流、物流、无害化处理、自繁自养、多点式饲养、全进全出2)建立、完善防疫和生产管理制度制定适于基层人员使用的操作程序(SOP)3)严格卫生消毒
11、制度4)做好PRRSV、PCV等免疫抑制性疾病的防控5)科学规范用药:种猪禁用皮质固醇类药物6)减少各种应激因素当前中国猪伪狂犬病的防控思路用安全性高的基因缺失疫苗(推荐HB-98或HB-2000株)进行基础免疫结合灭活疫苗,进行强化免疫,阻止感染和后备猪阳转净化种猪群,每年公猪和后备猪应为全阴性(猪只感染病毒将终生携带,成为该病传染源)维持种群净化,实现免疫无疫,探索非免疫无疫监测评估阻止发病阻止感染阻止排毒阻止阳转PART 04猪伪狂犬病的净化通过监测、检验检疫、隔离、扑杀等一系列综合措施,在特定区域或场所消灭和清除病原,从而达到并且维持在该范围内动物个体不发病和无感染的状态。猪伪狂犬病的
12、净化动物疫病净化是实现疫病消灭的必经之路流 行控 制净 化消 灭降低某种动物疫病的流行率消除特定区域内感染和病原整个国家消灭病原实现无疫动物群体中有某种疫病流行控制 净化“十三五”猪场疫病净化项目(2018YFD0500800)介绍精准净化技术研究疫病流行和病毒变异规律完善病原和抗体检测技术,实时评价疫苗效果探索非免疫无疫区域净化或协同净化技术探索区域净化和多病种协同净化模式形成普遍性的、可复制的净化方案,推广示范净化区建设区域生物安全体系建设规范疫病净化评估标准,维持区域净化效果适用于不同养殖模式逐步扩大净化范围维持区域净化项目总目标:开展猪瘟、猪伪狂犬病区域净化、种猪场高致病性蓝耳病净化集
13、成示范拟解决的关键科学问题:精准净化技术、区域净化技术、净化示范区建设项目任务分解35课题2:猪伪狂犬病净化技术研究与示范36猪伪狂犬病的净化猪伪狂犬病的净化过程 根据猪场规模、猪群结构和分布特点,设计合理的采样方案,对猪场进行摸底调查,掌握场内伪狂犬病疫情状况;评估猪群免疫保护水平(有条件采用中和抗体水平评价或细胞免疫水平评价),确定猪群的PRV gE转阳时间点与gB消长规律;评估猪场现有的免疫方案,针对不同的猪群进行优化改进,确保较高的免疫保护率。准备阶段控制阶段强制净化阶段猪伪狂犬病的净化过程 免疫-监测疫苗:含gE缺失的活疫苗和灭活疫苗;合理免疫程序;监测:每半年进行一次血清学和病原学
14、检查,抽样比例58%;阴阳性猪分群饲养当gE阳性猪比例下降到20%以下时开始分群,将血清学gE阳性猪与阴性猪分开饲养;逐步淘汰和缩小阳性猪群 强化阴性群的隔离与监测,建立完全健康的gE阴性猪群,确保后备猪群阴性 其它疫病的感染控制准备阶段控制阶段强制净化阶段猪伪狂犬病的净化过程 对全群猪只进行检测,剔除全部阳性猪只;剔除后建立的健康猪群于一个月后按10比例抽样复查,无阳性猪则三个月后按相同方法进行复查,连续两次为阴性者则每半年进行一次血清学和病原学抽样复查,抽样复查如有阳性,在阳性率1%以内,按剔除后建立的健康猪群方式进行免疫和监测,1%5%则重新进行全群检测剔除全部阳性猪只;关键点:公猪、后
15、备种猪 哨兵猪设置准备阶段控制阶段强制净化阶段猪伪狂犬病净化的非技术性关键因素生物安全建设猪伪狂犬病净化的非技术性关键因素生物安全建设病毒在猪场内传播病毒在猪舍内传播病毒在猪栏内传播项目取得的成果开展流行病学调查,阐明我国三种疫病的病原变异与分布情况针对我国生猪养殖业中猪瘟、猪伪狂犬病及猪繁殖与呼吸综合征病原变异与分布掌握不全面等问题,开展了大规模、系统性、持续性的流行病学调查,为掌握三种疫病的流行动态、高效诊断和防控产品的研发及三种疫病的精准净化提供了重要支撑。发现我国流行的CSFV为基因2.1亚型 发现我国流行的PRV为基因II型 发现我国流行的PRRSV主要为HP-PRRSV和NADC3
16、0-like毒株Viruses,2021Arch Virol,2020PeerJ,2018山西农业科学,2021中国兽医学报,2021畜牧兽医学报,2020微生物学报,2020不同PRV遗传变异分析PRSRV遗传进化分析CSFV遗传进化分析项目取得的成果建立了4种猪伪狂犬病诊断和检测技术,申报新兽药证书2项 建立了猪伪狂犬病变异毒株gB和gE蛋白的阻断ELISA抗体检测方法,与国外同类产品的符合率分别为96.30%和94.7%;均已提交新兽药注册申请;建立了猪伪狂犬病毒的PMA-qPCR检测方法,该方法能有效区分活死病毒,可对1.5104copies/L以内的病毒有效扩增,具有灵敏度强和特异性
17、高的特点;研制了猪伪狂犬病疫苗毒和野毒荧光定量PCR鉴别检测方法,适用于猪伪狂犬病病毒野毒与gI、gE基因缺失疫苗的鉴别诊断和PRV的流行病学调查。项目取得的成果研发1种猪伪狂犬病疫苗,开展2种候选疫苗技术储备,获得新兽药证书1项 研发了猪伪狂犬病gE基因缺失灭活疫苗(HNX-12株),获批新兽药证书;构建了PRV四基因缺失疫苗株(JXFC gE/gI/TK/gG),小鼠试验显示其安全性和免疫原性良好;研制了PRV囊膜糖蛋白gD 基因mRNA疫苗,研究表明该疫苗能够抵御病毒攻击,可以诱导良好的体液免疫与细胞免疫应答。项目取得的成果制定和完善三种疫病净化方案,标准6项、其他规范性文件17项,获批
18、地方标准4项,企业标准2项。项目取得的成果在全国14个省份的72家示范基地开展了三种疫病的净化 通过开展本底调查、集成净化方案并进行应用示范、定期对净化效果及净化维持效果进行监测评估、协助向有关部门递交评审材料,在牧原、温氏、中粮、扬翔、四川德康、大北农、金新农、上海新农、湖北金旭、湖北金龙、山西新大象、四川巨星等养猪集团公司及其他公司位于全国14个省份的72家示范基地开展了三种疫病的净化,其中14家通过国家动物疫病净化创建或示范场评审、年审、再评审或获得授牌;31家通过省级动物疫病净化创建或示范场评审或获得授牌;6家正在申请省级动物疫病净化创建或示范场。项目取得的成果建设三种疫病净化示范区2个针对我国生猪养殖业中大型疫病净化示范区缺乏等问题,开展了广西贵港地区和湖北江夏地区猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征净化示范区的建设探索,成功建立了广西贵港地区猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征净化示范区,为我国首个示范区,相关示范区的建设为在我国建设具有天然屏障的疫病净化示范区以及大城市郊区无天然屏障的疫病净化示范区提供了借鉴和参考。成功建立了广西贵港地区三种疫病净化示范区,为我国首个示范区 建设了湖北江夏地区猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征净化示范区敬请各位批评指正谢 谢!49