1、宸安生物 范雨庆流式质谱多指标检测助力临床精准医疗PART1:流式质谱技术简述宸安生物是国内第一家成功研制高性能单细胞质谱平台的公司从设备、试剂、到数据、软件的端到端原创技术分辨率6001200可调分辨率7001400可调灵敏度48*105cps(1ppb Tb159)灵敏度510*105cps(1ppb Tb159)仪器体积大型、落地仪器体积小型、桌面化样本可编码数量135+进样系统自动进样及清洗模块，兼备混匀制冷控温功能，兼容多种样本载具Starion星瀚Lunarion宵晖TM流式质谱VS传统流式平台迭代指标传统流式光谱流式质谱流式代表厂商抗体标签荧光基团荧光基团金属元素细胞分型精细度大

2、幅提升，金属标签选择更多通道数量2064135常规检测通道数量8色8-24色8-50色配色方案难难简单临床使用更加便捷，无需考虑荧光标签的串色及补偿荧光补偿需要不需要不需要试剂成本成本中等成本高成本低标签成本非常低，不需用稀有荧光素数据分析难难简单样本制备和数据分析自动化，无需复杂预处理自动化难以自动化难以自动化自动化检测速度免疫监控慢快快节省时间及人力，Barcode试剂可以实现多样本同时检测检测速度血液疾病慢快更快可拓展性无无可拓展革命性的标签体系，实现蛋白质以及核酸胞内胞外检测渠道下沉基层医疗：单激光小流式三甲医院：8色以上流式仅限于三甲医院易拓展有利于进入基层医疗市场，使用简单、自动化

3、流式质谱正式迈入临床诊断流式质谱编码试剂已取得30项相关试剂/抗体产品注册证，覆盖临床常见的流式抗体，可精准、稳定开展免疫细胞亚群分群等项目已有标记抗体目录300余种，可满足大部分主流检测需求，取证工作陆续开展中利用barcoding编码，可实现多样本同时上样、同时分析一次上机可以得到20个样本数据，单样本平均成本降低50%，大大节约检测成本与时间流式质谱抗体300+试剂体系，已完成30项试剂的注册申报宸安生物试剂体系流式质谱抗体，强大且稳定性能稳定！液体混合抗体再不同温度放置50天后PBMC染色结果-204RT37冻干微芯CD8CD4检测项目指标临床诊断结果%Starion星瀚检测结果%淋巴

4、细胞亚群CD3+T 细胞占淋巴细胞63.2462.44CD3+CD4+T细胞占淋巴细胞30.6631.14CD3+CD8+T细胞占淋巴细胞25.7225.16CD3-CD16+CD56+NK细胞占淋巴细胞23.6224.68CD3-CD19+B细胞占淋巴细胞11.111.24PART2:免疫概述及流式质谱技术多指标检测的临床应用临床流式应用场景及市场容量飞速发展流式细胞技术平台细胞分析淋巴细胞亚群检测白血病免疫分型微小残留病检测PNH检测血小板功能检测可溶性蛋白分析高通量细胞因子检测趋化因子检测根据Markets&Markets的统计，2021年流式细胞仪全球市场达43亿美元，预计2026年达

5、到63亿美元，复合增长率为8.1%。目前国内流式细胞仪市场约为12亿美元，复合增长率可达30%，可以看出国产流式细胞仪还有很大的增量空间。链接：https:/ eater”存在于血液和组织中巡逻、吞噬、消化、降解细菌，发生活化，将抗原呈递给其他细胞巨噬细胞的非免疫功能看家（“housekeeping”）：清除死细胞（如衰老的红细胞）、清除细胞碎片、不会伴随活化粒细胞肥大细胞单核/巨噬固有免疫非常重要的抗原递呈细胞，也可以从单核细胞分化而来pDC、cDC能将病原体、宿主突变细胞、过敏原等大分子，处理成适应性免疫（B、T细胞）可识别和读取的片段（抗原）单纯抗原不能活化T细胞，需与DC表面合适的MH

6、C分子共同递呈，因此MHC起着检查点的作用，帮助免疫细胞区分自我和外来的细胞既有固有免疫，又有适应性免疫功能胞内含特殊颗粒，颗粒内的蛋白诱导靶细胞穿孔和发生凋亡识别和杀灭病毒感染细胞或肿瘤细胞非常重要在小鼠模型中发现，NK细胞也能像适应性免疫细胞，保留记忆功能，从而在同种病原体二次感染时快速反应树突状细胞自然杀伤细胞NK适应性免疫B细胞B细胞两大功能：递呈抗原给T细胞；产生抗体中和病原体抗原结合并包裹病原体表面，发挥三重作用：中和、调理、补体激活中和抗体结合病原体调理结合了抗体的病原体，呼唤免疫细胞（如中性粒细胞、巨噬细胞）去吞噬和消化补体激活直接破坏、裂解细菌IgM通常对补体活化很重要IgD

7、活化嗜碱粒细胞IgG在中和、调理、补体活化过程很重要IgA在胃肠道黏膜的中和作用是必须的IgE在寄生虫和过敏反应中，活化肥大细胞B细胞抗体种类数不胜数，但主要五大类：IgM、IgD、IgG、IgA、IgE适应性免疫T细胞T细胞家族庞大：CD8+T细胞、CD4+T细胞、DPT、T、NKT作用：杀伤被感染的细胞，活化和募集其他免疫细胞CD8+T又称细胞毒T细胞，含特殊细胞毒颗粒，识别和杀伤病毒感染细胞和肿瘤细胞，受免疫系统严格调控CD4+T最常见分类：TH1、TH2、TH17、TregTH1针对胞内病原体（尤其是细菌），产生和分泌因子活化其他免疫细胞（如吞噬细菌的巨噬细胞），细胞免疫为主TH2针对

8、胞外病原体（如寄生虫），活化B细胞、粒细胞、肥大细胞，体液免疫为主TH17在控制胃肠道免疫平衡上特别重要，过度活化易导致自身免疫病Treg监视和控制其他T细胞活性，防止免疫异常活化，维持耐受性免疫T细胞临床免疫细胞检测方案的演变历程T亚群检测CD3/CD4/CD8/CD45淋巴细胞亚群检测CD3/CD4/CD8/CD19/CD16/CD56/CD45T细胞活化功能检测T亚群+CD27+HLA-DRT细胞耗竭功能检测T亚群+PD-1+CTLA4淋巴细胞精细免疫分型淋巴细胞亚群检测+CD28+HLA-DR可以满足临床需求吗？NO！1.固有免疫系统检测的缺失；2.淋巴细胞细分亚群检测的缺失；3.固有

9、免疫和适应性免疫关系的缺失。PanelPanel设计设计No.TargetLabelFunction1CD127139LaTreg2CD4141PrT3CD194/CCR4142NdTh subsets 4CD196/CCR6143NdTh subsets 5CD15144NdNeutrophils6IgD145NdMemory/Nave B7CD27146NdMemory/Nave T、B8CD45RO147SmMemory/Nave T9CD57148NdT Exhaustion10CD28149SmT Activation11HLA-DR151EuDC12CD8a152SmT13CD45

10、RA153EuMemory/Nave T14CD123/IL-3R154SmDC、Granulocyte15PD1155GdNo.TargetLabelFunction16CD183/CXCR3156GdTh subsets17CD11c158GdDC、Monocyte18CD16159TbNK19CD19160GdB20CD24161DyTransitional B21CD185/CXCR5162DyB、TFH22CD25/IL-2RA163DyTreg23CD14164DyMonocyte24TCRgd165HoT25CD56166ErNK、NKT26CCR7167ErMemory/Nav

11、e T27CD38170ErPlasmablast28CD45171YbLeukocyte29CD66b174YbGranulocyte30CD3175LuT研究目的：研究目的：现有基于荧光流式细胞术免疫细胞分析方案仅用于TBNK的骨架标志物的分析，难于覆盖免疫细胞各个精细亚群，分析的广度和精度均不足。基于流式质谱平台的创新试剂，提供了无需补偿的30指标分析方案。仅需1管，即可覆盖免疫细胞各个精细亚群，实现真正的免疫细胞全景分析。免疫细胞全景分析方案（免疫细胞全景分析方案（3030指标）指标）免疫细胞全景分析方案（30指标）数据展示样本X X圈门方案细胞亚群占比（%）细胞数All pre-pr

12、ocessing100.00%200257Time,Event_Length subsetpre-processing99.30%198865Width,Residual subsetpre-processing92.90%184828Center,Residual subsetpre-processing100.00%184817Offset,Residual subsetpre-processing100.00%184781DNA Ir191，Ir193Single cell99.80%184458Cells/CD3-CD19-/CD56+NK+36.30%13123Cells/CD3-C

13、D19-/CD56-CD14-CD16-CD123+HLA-DR-Basophils41.70%1155Cells/CD3-CD19-/CD56-CD14-CD16-CD11c+HLA-DR-cDC25.80%716Cells/CD3-CD19-/CD56-CD14-CD16-CD123+HLA-DR+pDC13.20%366Cells/CD3-CD19-/CD56-CD14hiCD16-cMo84.50%16898Cells/CD3-CD19-/CD56-CD14+CD16+iMo2.46%492Cells/CD3-CD19-/CD56-CD14-CD16-ncMo10.30%2062Cel

14、ls/CD45+CD66b-CD14-LYM82.50%87177Cells/LYM/CD3-CD19+B 12.00%10495Cells/LYM/B/CD27+Memory B34.00%3570Cells/LYM/B/CD27-IgD+Naive B64.10%6726Cells/LYM/B/CD24-CD38hiplasma2.61%274Cells/LYM/CD3-CD19-CD3-CD19-20.90%18220Cells/LYM/CD3-CD19-/CD56+NK72.70%13239Cells/LYM/CD3+T 66.40%57903Cells/LYM/T/CD4+CD4+T

15、42.60%24658Cells/LYM/T/CD4+T/CD38+HLA-DR+activated CD4+T0.98%242Cells/LYM/T/CD4+T/CD196-CD196-CD4+T58.40%14396Cells/LYM/T/CD4+T/CD196-CD194-CD183+TH113.40%1931Cells/LYM/T/CD4+T/CD196-CD194+CD183-TH210.80%1556Cells/LYM/T/CD4+T/CD196+CD196+CD4+T40.50%9983Cells/LYM/T/CD4+T/CD196+CD194+CD183-TH1731.80%3

16、174Cells/LYM/T/CD4+T/CD45RA-CD45RA-CD4+T61.20%15093Cells/LYM/T/CD4+T/CD45RA+CD45RA+CD4+T32.30%7969Cells/LYM/T/CD4+T/CD57+CD57+CD4+T1.79%442Cells/LYM/T/CD4+T/CD45RA+CD197-Effector CD4+T0.58%142Cells/LYM/T/CD4+T/CD45RA+CD197+Naive CD4+T34.50%8502Cells/LYM/T/CD4+T/CD45RA-CD197+Tcm CD4+T43.90%10826Cells

17、/LYM/T/CD4+T/CD45RA-CD197-Tem CD4+T19.10%4715Cells/LYM/T/CD4+T/CD185+PD-1+TFH1.83%451Cells/LYM/T/CD4+T/CD127lowCD25+Treg9.89%2438Cells/LYM/T/CD4-CD8-CD4-CD8-7.42%4296Cells/LYM/T/CD4-CD8-/CD57+gdTCD57+gdT4.59%197Cells/LYM/T/CD8+TCD8+T48.80%28230Cells/LYM/T/CD8+T/CD38+HLA-DR+activated CD8+T1.19%336Cel

18、ls/LYM/T/CD8+T/CD45RA-CD45RA-CD8+T41.70%11762Cells/LYM/T/CD8+T/CD45RA+CD45RA+CD8+T55.50%15679Cells/LYM/T/CD8+T/CD57+CD8+TCD57+CD8+T30.20%8526Cells/LYM/T/CD8+T/CD45RA+CD197-Effector CD8+T18.40%5181Cells/LYM/T/CD8+T/CD45RA+CD197+Naive CD8+T32.90%9295Cells/LYM/T/CD8+T/CD45RA-CD197+Tcm CD8+T5.53%1561Cel

19、ls/LYM/T/CD8+T/CD45RA-CD197-Tem CD8+T39.70%11200Cells/LYM/T/TCRgd+gdT4.87%2820Cells/LYM/CD3+CD56+NKT3.88%3380Cells/CD66b+Granulocytes40.90%75451Cells/CD66b+CD15-CD16-Eosinophils13.70%10351Cells/CD66b+CD15+CD16+Neutrophils85.70%64667深度检测47个细胞亚群TBNK精细分群T细胞分化阶段B细胞功能分析固有免疫系统免疫细胞（单核、粒、DC）表征亚群数据统计多领域专家共识推

20、荐精细免疫分型检测多领域专家共识推荐精细免疫分型检测PART3:病例分享病例患者：男，40岁因【发热5天，肝功能异常3天】入院，体温最高39.1度，有皮疹，无腹胀腹痛，无恶心呕吐，无咳嗽。WBC、CRP均正常，甲型、乙型流感病毒、H7N9筛查阴性，予连花清瘟口服，体温下降，自服泰诺、美林、散利痛、布洛芬，无明显好转，外院查肝功能异常，ALT 667U/L，AST 559U/L，总胆固醇Ch 26.9ummol/L。2日后ALT升至1874U/L，AST升至1114U/L，总胆固醇升至69.3ummol/L。2018年9月3日入院后查甲肝病毒核酸阳性，确认急性甲型肝炎。甲肝病毒胞内的模式识别受体

21、（Pattern RecognitionReceptors，PRRs）成员MDAS 入侵肝细胞。甲肝病毒复制快，病毒复制过程中的多种蛋白质均能有效抑制IFN（干扰素）诱导肝细胞无法高效诱导ISG（IFN-stimulated gene，干扰素刺激基因）表达，无法第一时间启动免疫反应清除病毒病毒疯狂复制，胀破肝细胞继续感染邻近肝细胞肝功能快速恶化。1.短兵相接，先失一城不过庆幸的是，人体的免疫系统并没有那么不堪肝细胞受到甲肝病毒蹂躏的时候，想到了pDC（浆样DC）这个强力援手，于是紧急呼叫pDC增援在pDC里面，type IFN得到高效表达，type IFN进一步激活T细胞并保护T细胞免受NK细

22、胞介导的攻击，是先天性和适应性免疫系统之间切换的关键环节。2.强援来到，扳回一局入院第二日细胞类型比例（%）参考范围总T细胞55.661.1%77.0%CD4+T23.425.8%41.6%CD8+T15.718.1%29.6%TH112.120.3-53.7TH230.846.1-78.9Treg0.51.2-4.0初始CD4+细胞12.26.1-26.6中央记忆CD4+细胞22.38.6-24.6效应记忆CD4+细胞1.50.1-2.9效应CD4+细胞30.712.0-30.6初始CD8+细胞15.13.6-21.8中央记忆CD8+细胞5.51.1-6.7效应记忆CD8+细胞22.86.3

23、-26.2效应CD8+细胞17.11.5-17.2总B细胞13.39.0%14.1%NK细胞22.58.1%25.6%DC12.20.5%1%时间进入战斗第三个月，由于初期pDC的信息传递，T细胞和B细胞得到了充分的动员，固有免疫顺利切换到适应性免疫；切换到适应性免疫后，细胞毒性T细胞可以杀灭一部分甲肝病毒，但由于细胞毒性T细胞、NK细胞在消灭病毒的同时，也造成了肝损伤，所以辅助性T细胞对甲肝的控制更加重要，辅助性T细胞的参与甚至比细胞毒性T细胞更早。3.援军抵达，敌军溃退第三月细胞类型比例（%）参考范围总T细胞80.661.1%77.0%CD4+T40.525.8%41.6%CD8+T25.

24、518.1%29.6%TH128.620.3-53.7TH285.746.1-78.9Treg3.31.2-4.0初始CD4+细胞12.26.1-26.6中央记忆CD4+细胞22.58.6-24.6效应记忆CD4+细胞1.560.1-2.9效应CD4+细胞30.712.0-30.6初始CD8+细胞15.33.6-21.8中央记忆CD8+细胞5.71.1-6.7效应记忆CD8+细胞22.16.3-26.2效应CD8+细胞17.81.5-17.2总B细胞18.19.0%14.1%NK细胞22.28.1%25.6%DC2.60.5%1%55.680.655.680.623.440.515.725.5

25、12.128.613.318.112.22.6细胞类型比例（%）参考范围总T细胞65.861.1%77.0%CD4+T40.325.8%41.6%CD8+T23.918.1%29.6%TH141.120.3-53.7TH279.946.1-78.9Treg3.21.2-4.0初始CD4+细胞25.46.1-26.6中央记忆CD4+细胞14.78.6-24.6效应记忆CD4+细胞1.80.1-2.9效应CD4+细胞17.812.0-30.6初始CD8+细胞14.63.6-21.8中央记忆CD8+细胞5.51.1-6.7效应记忆CD8+细胞18.96.3-26.2效应CD8+细胞13.41.5-1

26、7.2总B细胞13.19.0%14.1%NK细胞23.78.1%25.6%DC0.70.5%1%第四月HCV病毒RNA转阴80.665.885.779.92.60.7免疫细胞在体内凋亡机制的诱导下，回归正常水平，免疫细胞与甲肝病毒长达将近半年的战斗后，逐渐恢复了和平，免疫系统开始恢复平常安静的监控状态。4.凯旋整顿，恢复生产小结流式质谱技术作为新一代单细胞靶向蛋白质组学检测技术，具有灵敏度好、分辨率高、数据量大等多种优势，给用户带来丰富的蛋白质信息；宸安生物多指标检测方案可以为临床带来更加完整的固有免疫+适应性免疫系统的细胞数量和功能信息，提供个性化诊疗及精准医疗的强大依据。谨 致 谢 忱合作交流公众号