1.什么是基因芯片
基因芯片指的是在很小的载玻片等载体上,以大规模队列形式有序排列着大量的寡核苷酸,每个核酸分子都固定在芯片上可找寻的特定位置上,可以反映芯片上大量的拷贝互补信息,如基因表达谱鉴定,DNA序列测定,基因突变体检测分析等。基因芯片技术是一项由分子生物学、微电子学等多个学科交叉融合而成的新型高新检测技术。
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2.基因芯片的分类
基因芯片类型较为繁多,可以依据不同的分类方法进行分类,一般可分为以下几种:
(1)按照载体上所添加DNA种类的不同,基因芯片可分为寡核苷酸芯片和cDNA芯片两种:寡核苷酸芯片一般以原位合成的方法固定到载体上,具有密集程度高、可合成任意系列的寡核苷酸等优点,适用于DNA序列测定、突变检测、SNP分析等;其缺点是合成寡核苷酸的长度有限,因而特异性较差,而且随着长度的增加,合成错误率增加。寡核苷酸芯片也可通过预合成点样制备,但固定率不如cDNA芯片高,寡核苷酸芯片主要用于点突变检测和测序,也可用作表达谱研究。cDNA芯片是将微量的cDNA片段在玻璃等载体上按矩阵密集排列并固化,其基因点样密度虽不及原位合成寡核苷酸芯片高,但比用传统载体的点样密度要高得多,cDNA芯片最大的优点是靶基因检测特异性非常好,主要用于表达谱研究。
(2)按照载体材料分类:载体材料可分为无机材料和有机材料两种,无机材料有玻璃、硅片、陶瓷等,有机材料由有机膜、凝胶等。膜芯片的介质主要采用的是尼龙膜,其阵列密度比较低,用到的探针量较大,检测的方法主要是用放射性同位素的方法,检测的结果是一种单色的结果。而以玻璃为介质的芯片,阵列密度高,所用的探针量少,检测方法具有多样性,所得结果是一种彩色的结果,与膜芯片相比,结果分辨率更高一些,分析的灵活性更强。
(3)按照点样方式的不同可以分为原位合成芯片、微矩阵芯片、电定位芯片三种。
3.基因芯片特点分析
(1)高通量、多参数同步分析。目前基因芯片制作工艺可达到在25px2的载体平面上固定数万至数十万的探针,可对样品中数量巨大的相关基因,甚至整个基因组及信息进行同步检测和分析。
(2)快速全自动分析。在一定的条件下使样品中的靶基因片段同时与芯片的多个探针进行杂交,并采用扫描仪器测量杂交信号和分析处理数据。从而,从根本上提高了测量工作的速度和效率,也极大降低了测量工作的强度和难度。
(3)高精确度分析。由于芯片上的每一点,即每个探针都可以精确定位和选址,加上每个探针都可以精确设计及制备,因此可以精确检测出不同的靶基因、同一靶基因不同的状态以及在一个碱基上的差别。
(4)高精密度分析。商品化芯片制作上的精密及检测试剂和方法上的统一在一定程度上保证了芯片检测的高精密度和重现性,使不同批次乃至不同实验室之间的检测结果,可以进行有效比对及分析。
(5)高灵敏度分析。基因芯片选用了不易产生扩散作用的载体,探针及样品靶基因的的杂交点非常集中,加上杂交前样品靶基因的扩增和杂交后检测信号的扩张,极大地提高了检测的灵敏度,可以检测出1个细胞中低至1个拷贝的靶基因,从而使检测所需的样品量大幅度减少,一般只需要10~20μL样品。
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