《高致病性猪繁殖与呼吸综合征防控技术研究进展武华华威特.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《高致病性猪繁殖与呼吸综合征防控技术研究进展武华华威特.pdf(46页珍藏版)》请在三个皮匠报告上搜索。
1、华威特(江苏)生物制药有限公司 武华博士2023年3月23日第十一届李曼中国养猪大会暨世界猪业博览会母猪 流产、死胎、木乃伊、弱仔、不发情或返情率高等繁殖障碍 断奶后仔猪死亡率高育肥猪 高热、死亡、降低饲料利用率 增加治疗费用 免疫抑制导致继发感染或混合感染严重危害养猪业、兽药企业,包括化药、中药、消毒剂、活疫苗、灭活疫苗都要与PRRS沾边,或与净化联系起来。蓝耳病是经济疾病,猪场降本增效必须首先控制该病!蓝耳病仍然是当前猪病第一大危害蓝耳病疫苗是最经济、有效的控制手段 使用安全、有效的疫苗,制定科学免疫程序,可以有效控制蓝耳病;接种疫苗可迅速建立群体免疫力,提高群体免疫效果;减少抗生素等药物
2、用量,降低药物残留,保障食品安全。蓝耳病疫苗是最经济有效控制手段 经典PRRS活疫苗 VR2332株 CH-1R株 R98株 高致病性PRRS活疫苗 湖南株(HuN4-F112株)江西株(JXA1-R株)天津株(TJM-F92株 广东株(GDr180株)嵌合活疫苗 PC株 活疫苗高致病猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC-JXA1株)猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(CH-1a株)猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(M-2株)灭活疫苗蓝耳活疫苗选经典株还是变异株?CH-1R株,303,11%R98株,336,12%VR-2332株,254,9%JXA1-R株,692,26%TJM-F92株,522,19%H
3、uN4-F112株,135,5%GDr180株,49,2%PC株,81,3%CH-1a株,353,13%M-2株,8,0%蓝耳疫苗2018-2022近5年累计批签发数据目前市场上是蓝耳活疫苗与灭活疫苗、高致病性猪蓝耳病活疫苗TJM-F92株与经典毒株疫苗的博弈;关于停止生产猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC-JXA1株)的函 2007年核发灭活疫苗(NVDC-JXA1株)临时生产文号;2019年1月10日,农业农村部畜牧兽医局发布农牧便201931号关于停止生产猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC-JXA1株)的函,要求自2019年2月1日起,猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC-JXA1株
4、)生产企业全部停止生产该疫苗。2007年核发的临时生产文号同时废止。猪场选择使用蓝耳疫苗的疑虑:安全性01活疫苗毒与野毒间重组变异的问题;02使用蓝耳活疫苗导致临床副反应的安全疑虑;03灭活疫苗安全概念撬动养殖户重新使用。蓝耳病野毒与疫苗毒重组 活疫苗与野毒都存在重组风险,重组或变异使蓝耳病毒株毒力变弱或增强,是蓝耳病难于防范的特点;尽管分离到疫苗重组的病毒株,但缺乏重组病毒对猪场造成损失的评估,而定义高致病性疫苗不安全是缺乏科学依据的;单考虑病毒重组的生物安全,停用蓝耳病活疫苗,势必会大大增加猪场感染的风险,造成养殖户的损失。华蓝康疫苗安全分子基础:基因缺失关键技术:病毒传代致弱过程,使用克
5、隆传代技术,每隔5到10代克隆纯化一次;第18代克隆纯化时获得一株基因缺失病毒株,在Nsp2基因部位缺失360个核苷酸,缺失后19代病毒动物回归实验发现毒力减弱。病毒混合物单一病毒华蓝康(TJM-F92)基因缺失的意义 基因缺失标记疫苗是国际疫苗发展趋势;Nsp2基因缺失是病毒毒力减弱部分分子学基础,已得到国际上相同研究的佐证;更重要的是天津株不易发生毒力返强;Nsp2基因缺失,RT-PCR技术,可用于疫苗与野毒的鉴别诊断,用于种群净化辅助手段。国际同类研究 国际上使用反向遗传技术构建了猪繁殖与呼吸综合征基因缺失疫苗(P129株),在Nsp2基因缺失393个核苷酸,缺失后病毒毒力消失;TJM-
6、F92株Nsp2基因缺失360个核苷酸,缺失的区段大部分重叠。Dal-Young Kim et al:Insertion and deletion in a non-essential region of the nonstructural protein 2(NSP2)of porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)virus:effects on virulence and immunogenicity.Virus Genes(2009)38:118-128.TJM-F92株基因缺失与鉴别诊断1a1b2a2b435675CAPRN
7、A 多聚酶(RNA Polymerase)结构蛋白(Structure Protein)(A)nNsp2 基因经典PRRS病毒RNA 基因结构示意图高致病性PRRSVNsp2基因90个核苷酸缺失TJM-F92疫苗株Nsp2基因360个核苷酸缺失90个核苷酸缺失360核苷酸缺失克隆筛选传代多肽 ELISA诊断试剂盒RT-PCR技术设计引物检测病原检测抗体RT-PCR鉴别诊断野毒与疫苗毒M 1 2 3 4 5 1000 bp500 bp644bp1004bp1.F3野毒,2.F17野毒与疫苗毒混合,3-5.F92疫苗毒PRRSV TJ株F3、F15、F19和TJM-F92株接种试验动物的体温变化曲
8、线 华蓝康:TJM-F92株疫苗安全性 各种年龄猪均安全,疫苗接种后未见临床副反应,包括妊娠期怀孕母猪;病毒血症持续时间短:约2-4周;水平传播能力弱,即同居感染能力弱;疫苗毒猪体五代传代未见毒力返强,基因缺失不易发生返强;无免疫抑制,可与猪瘟、伪狂犬等疫苗同步使用。华蓝康(TJM-F92)疫苗使用 国内最大的养猪集团,多年来一直坚持使用TJM-F92株疫苗,猪群稳定,未见安全问题;养殖企业广泛应用,TJM-F92株逐渐成为主流产品;蓝耳不稳定或发病的猪场可使用华蓝康进行紧急免疫;TJM-F92株的名字前缀写了“高致病性”的字样,加之其它疫苗毒株的毒力较强,误解TJM-F92株视为不安全。华蓝
9、康免疫效力研究(一)华蓝康(TJM-F92株)和蓝耳灭活疫苗对流行NADC30提供交叉保护?华蓝康(TJM-F92株)和灭活疫苗效力比较研究实验-NADC30-like攻毒试验设计组别数量疫苗免疫程序攻毒攻击途径、剂量0日首免21日二免首免后49日第1组5(TJM-F92株)活疫苗华蓝康1头份/头/NADC30攻毒106.7TCID50/ml滴鼻2.0ml/头1.0ml/鼻孔第2组5市售灭活疫苗(CH-1a,L)2.0ml/头2.0ml/头第3组5PBS2.0ml/头/华蓝康(TJM-F92株)活疫苗,批号:20200505008,106.0TCID50/头份,华威特(江苏)生物制药有限公司提
10、供;灭活疫苗(Ch-1a株),购自国内L公司。华蓝康(TJM-F92)和灭活疫苗效力比较研究实验-NADC30-like攻毒体温情况组别ID试验天数(日)(超过40.2C标红)011TJM-F92活苗免疫组32039.539.839.639.939.440.039.839.739.839.539.139.333039.439.939.840.239.839.539.639.239.339.439.539.034639.739.839.539.840.039.139.439.239.639.339.238.938739.339.839.839.839.639.639.839
11、.839.539.239.439.537939.039.839.439.839.54039.939.739.73938.739.3Ch-1a市售灭活苗(L)免疫组38639.740.540.340.339.841.240.639.239.539.439.139.537039.840.639.940.040.040.540.440.139.539.939.039.339839.541.340.841.640.640.540.740.539.740.239.239.739439.540.840.440.339.941.741.040.539.740.339.839.234339.440.339.8
12、40.039.741.040.440.140.340.539.539.4对照组32339.840.240.040.340.441.240.840.440.540.940.340.234039.139.739.539.739.440.039.539.940.040.239.639.338039.140.840.541.541.241.541.341.641.741.140.841.236339.041.140.340.740.741.640.540.141.541.040.539.737839.139.739.839.840.240.139.739.640.240.640.539.7华蓝康(TJ
13、M-F92)和灭活疫苗效力比较研究NADC30-like攻毒临床症状组别ID试验天数(日)11TJM-F92活苗免疫组320NNNNNNNNNNN330NNNNNNNNNNN346NNNNNNNNNNN387NNNNNNNNNNN379NNNNNNNNNNNCh-1a市售灭活苗(L)免疫组386NNNNABBNNNNN370NNNNNNCNNNN398NNNNNCCNNNN394NNNNABACABCACDNN343NNNBABCABCABCABCCNN对照组323NNNABABABABABABABDABD340NNNBBBNNBNN380NNNABABABABABABA
14、BAB363NNNABABABABABABABA378NNNABABABABBBNN注:A 精神沉郁;B 食欲减退;C 眼结膜炎;D 呼吸困难;H 死亡;N 正常华蓝康(TJM-F92)和灭活疫苗效力比较研究NADC30-like攻毒临床表现 NADC30-like株强毒攻击后,TJM-F92株活苗免疫猪精神、食欲、行为活动均正常;PRRS灭活苗免疫组,3/5仔猪出现不同程度的精神沉郁、食欲下降、结膜炎等症状。试验期间,TJM-F92株活疫苗免疫猪均未见临床异常攻毒后第5日起,PRRS灭活苗免疫猪开始出现精神沉郁、食欲减退等症状华蓝康(TJM-F92)和灭活疫苗效力比较研究NADC30-lik
15、e攻毒统计结果试验组别使用疫苗体温升至41三次以上临床症状死亡动物数保护率一组TJM-F92活苗免疫组0/50/50/55/5二组CH-1a株市售灭活苗(L)免疫组5/55/50/50/5三组未免疫对照组5/55/50/50/5华蓝康和灭活疫苗对NADC30-like的保护结果 TJM-F92株对于当前流行的NADC30-like野毒株(HN2016株)具有交叉保护,攻毒后没有体温和临床症状,没有肺部病变;CH-1a灭活疫苗对于当前流行的NADC30-like野毒株(HN2016株)无交叉保护,免疫组攻毒后的猪有超过7天的体温超过40.2,有蓝耳病临床症状和肺部病变。TJM-F92株对NADC
16、30交叉保护研究 南京农业大学姜平教授团队比较TJM-F92株和R98株对流行NADC30-like(FJ1402)的交叉保护研究;结果:TJM-F92株和R98株疫苗均能够对NADC30-like的攻击提供良好或部分交叉保护;攻毒后,TJM-F92株免疫的猪没有临床体温,R98株免疫有个别猪的发热。姜平团队研究TJM-F92株对NADC30交叉保护结果 数据来源:南京农业大学 姜平研究团队-2016结论:1.R98株免疫攻毒后出现发热反应2.TJM-F92株免疫后没有出现发热反应3.R98株和TJM-F92株免疫攻毒后14日均检测不到攻击毒TJM-F92株对NADC30交叉保护研究 华威特生
17、物研发团队研究NADC30(HN201605)的交叉保护;结果:华蓝康对NADC30-like的攻击提供良好交叉保护。华蓝康免疫效力研究(二)华蓝康(TJM-F92株)和蓝耳灭活疫苗对高致病性蓝耳病强毒(TJ株)保护效果?华蓝康(TJM-F92株)与灭活疫苗效果对比高致病性强毒TJ株攻毒组别数量疫苗免疫程序攻毒攻击途径、剂量0日首免21日二免首免49日攻毒第1组5HP-PRRSV TJM-F92株活疫苗1头份/头/攻击HP-PRRSV TJ F3104.5TCID50/ml滴鼻2.0ml/头1.0ml/鼻孔第2组5CH-1a株市售灭活疫苗(L)2.0ml/头2.0ml/头第3组5PBS2.0m
18、l/头/华蓝康(TJM-F92株)活疫苗,批号:20200505008,106.0TCID50/头份,华威特(江苏)生物制药有限公司提供 灭活疫苗(Ch-1a株),购自国内L公司华蓝康(TJM-F92株)与灭活疫苗效力评价对比试验TJ株攻毒后体温监测组别ID试验天数(日)(超过40.2C标红)011TJM-F92活苗免疫组40039.038.739.339.739.438.939.539.638.738.639.338.530239.339.238.538.939.238.739.138.838.739.438.539.637339.439.139.238.739.538
19、.538.738.939.238.638.539.437739.239.438.639.238.938.539.138.739.439.339.739.539939.439.339.539.439.639.439.739.539.639.339.739.8CH-1a株市售灭活苗免疫组32739.639.839.740.740.741.541.341.540.040.9/35639.240.740.341.240.941.341.441.240.841.039.739.935739.339.340.641.340.941.741.2/35939.540.340.940.641.341.240.7
20、39.739.039.039.039.036939.041.139.840.541.240.941.438.738.4/对照组43039.439.141.140.639.841.441.341.241.340.941.140.743539.239.540.241.340.241.341.941.341.840.340.539.943639.139.239.740.540.741.741.941.641.440.840.139.740239.439.340.141.340.641.542.142.541.941.0/43739.239.539.740.941.741.341.541.641.64
21、0.740.340.0ADE效应 组别ID试验天数(日)11TJM-F92活苗免疫组400NNNNNNNNNNN302NNNNNNNNNNN373NNNNNNNNNNN377NNNNNNNNNNN399NNNNNNNNNNNCH-1a株市售灭活苗(L)免疫组327NABABABABCABCABCABCABCH/356NABABABABCABCABCABNNN357NABABABABCABCH/359NABABABABCABCABCABABABN369NABABABABCABCABCABCH/对照组430NNNBABABABDABDABDABDABD435NNNBABABA
22、BDABDABCDABDABD436NNNBABABABDABDABDABCDABCD402NNNABABABABDABDABH/437NNNABABABABDABDABCDABDABD华蓝康(TJM-F92株)与灭活疫苗效力评价对比试验TJ株攻毒后临床症状注:A 精神沉郁;B 食欲减退;C 眼结膜炎;D 呼吸困难;H 死亡;N 正常华蓝康(TJM-F92株)与灭活疫苗效力评价对比试验TJ株攻毒后临床表现l HP-PRRSV TJ株强毒攻击后,PRRS灭活苗免疫猪均出现不同程度的精神沉郁、食欲下降、结膜炎等PRRS典型症状,至攻毒后第10日死亡3头,仔猪均未获得保护,且临床症状出现时间较对照组
23、提前23日;l TJM-F92株活苗免疫猪精神、食欲、行为活动均正常。试验期内,TJM-F92株活疫苗免疫猪均未见临床异常攻毒后第5日灭活苗免疫猪出现PRRS典型临床症状华蓝康(TJM-F92株)与灭活疫苗效力评价对比试验TJ株攻毒后剖检图l PRRS灭活苗免疫组,3/5猪出现明显的肺脏病变,2/5小面积病变;l TJM-F92株活苗免疫猪肺脏4/5正常,1/5(377号出现小片病变)。CH-1a株市售灭活苗(L)免疫组TJM-F92株活苗免疫组华蓝康(TJM-F92株)与灭活疫苗效力对比试验TJ株攻毒统计试验组别使用疫苗体温升至41三次以上肺脏剖检片状实变临床症状死亡动物数保护率一组TJM-
24、F92活苗免疫组0/51/50/50/580%二组CH-1a株市售灭活苗(L)免疫组5/54/55/53/50三组未免疫对照组5/55/55/51/50华蓝康(TJM-F92株)与灭活疫苗效力总结TJM-F92株活疫苗免疫后对高致病性蓝耳病强毒株攻毒完全保护;Ch-1a株灭活苗免疫后对高致病性蓝耳病强毒株攻毒无保护;Ch-1a株灭活疫苗免疫后攻毒表现出典型ADE抗体依赖性增强作用(ADE效应)病毒特异性抗体能使病毒更易于侵入机体的靶细胞,从而导致感染力增强。灭活疫苗免疫产生的抗体不但不能提供保护作用,反而协助病毒进入靶细胞,有助于病毒的复制,提高感染率,使病毒的数量大大增加。非中和抗体FcR方
25、便病毒进入靶细胞感染华南农大黄毓茂教授团队三种蓝耳活疫苗的安全性和有效性进行比较分组数量使用疫苗攻击用强毒攻毒途径攻毒剂量T17无疫苗对照(DMEM)不攻击病毒对照(DMEM)滴鼻+肌肉注射各1ml104.0TCID50/mlT27无疫苗None温氏分离强毒株TP株Genbank登录号:EU864233.1T37IngelvacT47TJM-F92T57JXA1-R三种蓝耳活疫苗的安全性比较结果T5:JXA1-R组T4:TJM-F92组图为:免疫后28日内平均日增重结论:江西株出现体温升高和日增重下降,TJM-F92株未见体温升高和日增重降低。图为:免疫后7日内体温变化三种蓝耳活疫苗的保护效率
26、结果T2 空白对照组T3 IngelvacMLV组结论:TJM-F92株和江西株对流行毒株保护效率高,而IngelvacMLV组攻毒后有临床症状和体温升高。图为:攻毒后的体温变化图为:攻毒后临床评分T4 TJM-F92组华蓝康与其它TJM-F92株疫苗的区别悬浮培养:生产关键工艺改进,提高病毒效价;更有效:疫苗批次间稳定,抗原高于106.0TCID50/头份,超过国标;更安全:无污染、无抗生素、低血清培养,外源病原检测内控标准更严格;优化耐热冻干保护技术:更加便于储存运输,有效期24个月;严格控制生产的种毒批次,保障免疫效力;持有全球专利和疫苗所有权,独家生产销售。华蓝康:紧急免疫临床应用05
27、017/1/12017/1/82017/1/152017/1/222017/1/292017/2/52017/2/122017/2/192017/2/262017/3/52017/3/122017/3/192017/3/262017/4/22017/4/92017/4/162017/4/23Abortion numberSows abortion of CF-I2/28-3/1 所有母猪紧急免疫华蓝康(TJM-F92)4/1 所有母猪正常免疫猪瘟紧急免疫结果:全群母猪紧急免疫华蓝康后,流产比例明显降低。案例:5000头母猪场关于蓝耳病净化 农业农村部关于推进动物疫病净化工
28、作的意见(农牧发202129号)力争通过5年时间,80%的国家畜禽核心育种场(站、基地)通过省级或国家级动物疫病净化场评估,构建猪繁殖与呼吸综合征等重大动物疫病净化场;净化基本程序:减少活疫苗-停用活疫苗-亚单位或灭活疫苗-监测-淘汰-更新-阴性猪群的生物安全措施-保持阴性状态;技术保障:目前没有有效灭活或亚单位疫苗,淘汰阳性猪需要大量财力支撑,国际上没有成熟的蓝耳病净化技术可借鉴;蓝耳病净化 生物安全保障;标记疫苗+配套的RT-PCR试剂盒,达到疫苗毒与野毒的区分;误区:灭活疫苗净化 化学药物净化 激素控制的净化净化的权衡 猪群面临感染的风险与净化的维护成本;净化与疫苗免疫的评估:临床状况:
29、健康无流产发,抗原阴性;生产指标:繁殖指标、断奶健仔数、保育和育肥的健康度、日增重;一旦有疫情预警时,可使用华蓝康紧急免疫;结论疫苗免疫不是控制蓝耳病的唯一方式,但一定是最简单、最直接、最经济和最有效的方式。使用华蓝康(高致病性繁殖与呼吸综合征活疫苗,TJM-F92株,悬浮培养)是防控蓝耳病的最好选择!个人简介 研究员/教授,博士生导师 国家特聘专家 国务院特殊津贴A类获得者 第一届全国动物防疫专家委员会委员 第五、六届中国兽药典委员会委员 江苏省创新团队领军人才 江苏省双创人才 泰州113领军人才 新泰州建设功臣v 主持完成了农业部公益性行业(农业)科研专项(项目首席专家)、科技部支撑计划、国家863计划、“十三五”重点研发计划、江苏省成果转化等科研项目。v 1978-1990:攻读学士、硕士、博士v 1990-1995年任职于中国兽医药品监察所v 1995-2004年先后任职美国堪萨斯州立大学,美国先灵葆雅、辉瑞动保资深科学家v 2004年回国先后担任乾元浩生物、内蒙古必威安泰、吉林国原动保公司总经理v 2011年创建华威特(江苏)生物制药有限公司2004年回国后的荣誉国内外工作经历主持多项国家级省科研项目感谢聆听!