《非洲猪瘟疫苗的研制;现状和未来反方向道格拉斯·格莱德, 美国农业部.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《非洲猪瘟疫苗的研制;现状和未来反方向道格拉斯·格莱德, 美国农业部.pdf(35页珍藏版)》请在三个皮匠报告上搜索。
1、用于控制非洲猪瘟(ASF)的疫苗开发:我们的研究现状以及研究方向Douglas Gladue,PhD资深科学家:Plum Island Animal Disease Center-USDA-ARS科学主管:Global African Swine Fever Research Alliance财务主任:World Society for VirologyDouglas.Gladueusda.gov 非洲猪瘟病毒非洲猪瘟病毒 非洲猪瘟病毒:非洲猪瘟病毒病毒科双链DNA基因组长度170-190kb 150+基因极少地被详细研究过(大约20)对亚临床感染有很高的致死率(100%)出血、水肿、腹水和休
2、克 野猪、疣猪、家猪病毒/宿主因素导致了不同的结果 仍然不甚了解 不同毒株的毒性 不同的宿主物种症状/致死率 长期的持续/潜伏感染 在猪群中传播地快速且强效非洲猪瘟病毒非洲猪瘟病毒:传播传播 在粪便中数天 在受污染的围栏里几个月 在冰冻的尸体中多年 猪肉产品:在盐渍/干火腿中,发现时已超过生产日期140天。泔水喂养、垃圾、废弃物2019年3月17日,联邦调查局查获100万磅从中国走私到新泽西州港口的猪肉2020年8月,美国海关办公室查获201磅猪肉藏在 卡车发动机舱内的猪肉2020年6月19日,洛杉矶和长滩的港口。缴获19,555磅来自中国的违禁肉制品(报道来自:洛杉矶时报)肯尼亚1921欧洲
3、零爆发1990s葡萄牙1957巴西1970s根除ASF非洲猪瘟的爆发 非洲以外:大部分是零星的爆发,在国家之间的传播有局限性 未煮熟/未煮透的猪肉制品 (进口,非法)葡萄牙、西班牙、意大利、比利时 机场或航运港口的生猪肉废料/垃圾 里斯本、马耳他、撒丁岛 西班牙 1960意大利1983比利时1985马耳他撒丁岛1978非洲猪瘟在非洲一直处于地方性流行状态非洲猪瘟的爆发 非洲猪瘟在非洲一直处于地方性流行状态ASFV in 2005 肯尼亚1921欧洲零爆发1990s葡萄牙1957巴西1970s根除ASF西班牙 1960意大利1983比利时1985马耳他撒丁岛1978从格鲁吉亚的单一疫情而导致的非
4、洲猪瘟大爆发中国中国 Aug 2018格鲁吉亚格鲁吉亚2007高加索地区高加索地区 俄罗斯俄罗斯 2007蒙古蒙古Jan 2019越南越南Feb 2019柬埔寨柬埔寨April 2019香港香港朝鲜朝鲜 May 2019老挝老挝June 2019菲律宾菲律宾July 2019缅甸缅甸比利时比利时Aug 2019印尼印尼Nov 2019东帝汶东帝汶韩国韩国June 2019巴布亚新几内亚巴布亚新几内亚March 2020 印度印度Jan 2020拉脱维亚拉脱维亚爱沙尼亚爱沙尼亚白俄罗斯白俄罗斯波兰波兰2014乌克兰乌克兰 2012德国德国Sept 2020 肯尼亚192
5、1欧洲零爆发1990s葡萄牙1957巴西/加勒比海地区 1970sEradicated 非洲猪瘟的爆发轨迹 匈牙利匈牙利April 2018Iran2008马来西亚马来西亚Feb 2021多米尼加多米尼加共和国共和国April 2021海地海地Nov 2021不丹不丹May 2021泰国泰国Jan 20222022 ASFV 大流行2021年:传入多米尼加共和国 在西半球的首次爆发第五届第五届GARA科学会议,蓬塔卡纳,多米尼加共和国科学会议,蓬塔卡纳,多米尼加共和国 2022年年5月月 Global African Swine Fever Research Alliance全球非洲猪瘟研究联
6、盟全球非洲猪瘟研究联盟https:/www.ars.usda.gov/GARA/网络研讨会:ASFV疫苗研究 May 2021:GARA Scientific Communications-YouTube网络研讨会:ASFV 基因测序:GARA Scientific Communications-YouTubeASFV 疫苗缺口疫苗缺口:病毒蛋白的保护性免疫力未知 难以制造亚单位疫苗 所有尝试都是失败的,或者只能提供少量的保护率 成功的亚单位疫苗都是针对低毒性毒株的 需要大剂量-在商业上不可行 即使在大剂量作用下,灭活疫苗也不能提供很好的保护 不可能使用灭活疫苗 目前唯一的选择是减毒活疫苗 毒
7、性减弱的分离物是由:低毒性水平的分离物 所有公布的疫苗都有残余的毒力 通过组织培养过程以减弱病毒毒性 病毒的适应性导致了猪体内复制能力的丧失(并非疫苗)进行过基因删除的病毒减毒活疫苗减毒活疫苗(LAV)可以高效完成可以高效完成 抵抗抵抗同源性同源性病毒病毒的的任务任务美国农业部(USDA)非洲猪瘟疫苗平台 ASFV减毒活疫苗可以防卫非洲猪瘟格鲁吉亚株(ASFV-G)ASFV-G 9GL Journal of Virology 2015 Aug;89(16):8556-66 9GL首次被确定为毒性确定物,Lewis等人完成毒性物分离:马拉维 在单次,低剂量下有保护作用 V在较高剂量下具有病毒性
8、需要进一步毒性减弱ASFV减毒活疫苗可以防卫非洲猪瘟格鲁吉亚株(ASFV-G)ASFV-G-9GLUK UK:Zsak等人在E75分离株中首次将其确定为毒力因子删除UK基因可使病毒减弱至少100倍 在104 HAD50 的时候接种一次就能诱导保护 完成双重基因删除的减毒活疫苗可以抵御目前爆发的ASFV-G毒株ASFV-G-MGF 6个MGF基因的缺失 单一低剂量时有保护作用 高剂量时无临床症状,一天轻度发烧 定制一个考虑到了不同来源的生物信息学和功能性基因组数据的计算途径 I177L:可预测的免疫调节蛋白 基因删除I177L让其成为最优的非洲猪瘟候选疫苗(ASFV-G-I177L)ASFV 减
9、毒活疫苗#3:新的基因目标关于最小剂量的研究:在 NAVETCO生产的ASFV-G-I177L 越南毒株的分离挑战 重复USDA公布的最小剂量 102 较高的疫苗剂量没有临床症状或残余毒力ASFV-G-I177L 是一种有效的疫苗对本地猪种和欧洲猪种都有效评估ASFV-G-I177L的脱落情况以及向幼猪的传播情况 78 周龄幼猪 ASFV-G-I177L102.6很明显,尽管在多次检验中可以从所有接种的动物中检测到疫苗病毒的基因组,但在实验过程中没有一头有感染风险的幼猪出现系统性感染。没有一只有感染风险的动物产生任何可检测水平的ASFV抗体,这支持了ASFV-G-I177L在有感染风险的动物中
10、无法系统性复制的说法田野环境下的病毒传播50头10周龄的猪接种两次 102.6 的ASFV-G-I177L10头具有潜在感染风险的动物在49dpi时被混合在一起 其中3头的PCR呈阳性10头具有潜在感染风险的动物有5只产生了ASFV+抗体 在田野条件下,ASFV-G-I177L具有一定的传播性,因为一些具有感染风险的猪产生了系统性病毒复制和诱导ASFV特异性免疫反应。毒力恢复性的研究68 周龄幼猪ASFV-G-I177L102.8从组 1抽取2ml 集合的血液样本组 1 组 2 从组 2抽取2ml 集合的血液样本组 3 从组 3抽取2ml 集合的血液样本组 4从组 3抽取2ml 集合的血液样本
11、组 5毒力恢复性的研究从表型上看,ASFV-G-I177L在五次连续的回输中保持稳定。通过二代测序证实ASFV-G-I177L疫苗的在基因学上是稳定的。成功完成了病毒毒力恢复性研究 疫苗在猪群身上的5个连续回流体现的遗传稳定性 疫苗在遗传和表型上都很稳定 检针对病毒脱落和病毒传播的大规模实验证实,即使在不同的条件下,ASFV-G-I177L是一种安全的减毒活疫苗。在越南完成了田野试验(成功)ASFV-G-I177L 安全评估总结 ASFV-G-I177L 总结 诱导欧洲猪或越南猪的保护作用的IM剂量为 102 HAD50 即使在ON或IM剂量为106 HAD50,也缺乏残余毒力 针对原始ASF
12、V-G株和最近ASFV-G-越南株的有效疫苗。疫苗实验室结果在商业规模上得到重复利用 通过完成大规模的安全性研究和毒力恢复性的研究,证实了ASFV-G-I177L是一种安全的疫苗 在所有针对ASFV-G的减毒活疫苗中安全性最高 针对ASFV-G的最有前景的实验性疫苗ASFV-G-I177L 的限制 只在原代猪巨噬细胞中生长 原代细胞在商业使用上有限制 需要供体动物 分离需要耗费大量时间 监管问题 价格昂贵 无法制作用于疫苗生产的主细胞系 缺少血清学的DIVA(从接种疫苗的动物中区分感染)对细胞系的筛选确定了一个内部细胞系 PIPEC(梅岛猪上皮细胞)连续的传代增加了病毒产量 在第十一代时达到了
13、106-107 滴度呈5-6对数增长PIPEC 细胞 不需要任何特殊的培养基要求 细胞生长迅速 可作为潜在疫苗生产的特点梅岛猪上皮细胞(PIPEC)适应了ASFV-G-I177L 的基因组稳定性 病毒在第7、11、20、30位进行了测序 在基因组左侧变异区进行了删除(LVR)修改了10个基因 删减8个基因,融合2个基因 7个MGF基因 MGF 360-6L,8L,9L,10L&MGF 300-1L,2R,4L X69R 部分ORF的融合:MGF 360-4L&11L 在PIPEC中,基因组变化可以稳定发生多达30位 E119L 的点突变在20-30位传递之间.丝氨酸到苏氨酸ASFV-G-I17
14、7LLVR1R2R3R4R5R6R12L13L14L11L10L9L8L4L2R1LX69R6L4L13Lb13La10L9L7RASFV-G-I177LLVR1R2R3R4R5R6R12L13L14L11L10L9L8L4L2R1LX69R6L4L13Lb13La10L9L7RASFV-G-I177LLVR中的MGF基因的缺失与候选疫苗或其他细胞培养的适应性病毒中的MGF基因不同。1R2R3R4R5R6R12L13L14L11L10L9L8L4L2R1LX69R6L4L13Lb13La10LASFV-CN-MGF110-9L9L7RASFV-CN-MGF505-7R1R2R3R4R5R6R1
15、2L13L14L11L10L9L8L4L2R1LX69R6L4L13Lb13La10L9L7R1LX69R6L4L13Lb13La10L9L1R2R3R4R5R6R12L13L14L11L10L9L8L4L2R7RASFV-G-X69RASFV-BeninMGF 1R2R3R4R5R6R12L13L14L11L10L9L8L4L2R1LX69R6L4L13Lb13La10L9L7RASFV-G-VERO1R2R3R4R5R6R12L13L14L11L10L9L8L4L2R1LX69R6L4L13Lb13La10L9L7R1R2R3R4R5R6R12L13L14L11L10L9L8L4L2R1L
16、X69R6L4L13Lb13La10LASFV-GMGF-USDA1R2R3R4R5R6R12L13L14L11L10L9L8L4L2R1LX69R6L4L13Lb13La10LASFV-HLJ-MGFCD29L9L1R2R3R4R5R6R12L13L14L11L10L9L8L4L2R1LX69R6L4L13Lb13La10LASFV-GMGF9GL-USDA9L在MGF区域的PIPEC适应性突变LVR 与以前研究的其他MGF缺失位置不同 PIPEC 适应性:ASFV-G-I177L LVR 对猪群的有效性:ASFV-G-I177L LVR 和 ASFV-G-I177L 剂量为102 to 1
17、06都会产生类似的低水平病毒血症 共同饲养的前哨猪群保持阴性(血液和脾脏)早在7dpi就观察到ASFV-G-I177L LVR的抗体反应与ASFV-G I177L相似 ASFV-G-I177LLVR 可 100%诱发保护作用102 ASFV-G-I177LLVR:疫苗效力ASFV-G-I177LLVR总结 保持亲代ASFV-G-I177L的安全状况 在PIPEC细胞中生长到高滴度 PIPEC细胞是一种适合ASFV疫苗生产的细胞系 针对ASFV-G的最有前景的实验性疫苗 ASFV 疫苗的发展现状 项目初始第一阶段疫苗的安全和效力第二阶段 扩大试验范围第三阶段实地试验 注册/管控批准市场投放ARS
18、 patentLicensing许可证合伙人CRADA.MTRA ASFV-G-I177L Navetco ASFV-G-9GLUK-undisclosedASFV-G-9GLUKASFV-G-MGF (4 Undisclosed Licenses)ASFV-G-I177L (6 undisclosed Licenses)ASFV-G-I177LLVR(5 undisclosed Licenses)1.全球市场的疫苗需求2.美国的疫苗储备 PIADC 科学家的加入 (5 Undisclosed Licenses)ASFV-G-I177L LVR Navetco ASFV-G-I177L Kom
19、ipharm ASFV-G-I177L LVR KomipharmASFV-G-I177L-Dabaco ASFV-G-I177L LVR-Dabaco ASFV-G-I177L 成为第一个用于非洲猪瘟的商业化产品 首次商业化投入市场60万剂疫苗 第二代ASFV疫苗:ASFV-G-I177LLVR 第三代ASFV疫苗:血清学DIVA 对I177L的Elisa检测-与商业伙伴合作的初步结果是非常有前景的 其他DIVA目标(从接种疫苗的动物中区分感染)ASFV-G-I177L 在越南的应用现状 新闻报道ASFV-G-I177L在没有密切监督的疫苗使用地区有一定程度的毒性或导致猪群轻度发病 新闻,非
20、数据驱动的研究报告 疫苗接种后7天,表现出症状的猪对野生型ASFV检测呈阳性 疫苗需要21天才能产生免疫力 Navetco疫苗为2剂 在疾病暴发的地区,疫苗的使用没有得到监督 不按标签使用可能导致问题 标签说明仅适用于8-10周龄的健康猪 在没有任何与疫苗问题有关的报告的地区,无论是否有疾病爆发,都将继续进行疫苗接种,所有的疫苗接种都将在监督下继续进行。因此,只有在那三个出现问题,不当使用,或者在没有监督的情况下使用疫苗的省份,才会暂停疫苗接种。Borca LabElizabeth RamirezAyushi RaiTed SpinardPrevious PIADC:Vivian ODonne
21、ll Keith Berggren Ryan Baker-Branstetter Nino Vepkhvadze Melanie Prarat Jolene Carlson Ignacio Fernandez-Sainz Paige Fletcher Devendra Rai Paul Azzinaro Lauren Holinka-PattersonBrent Stanford Alexia Alfanso Dr.Lu Betty Bishop Peter Krug Michael SingerGladue Lab Nallely EspinozaElizabeth VuonoAlyssa ValladaresPIADC ASFV SYs Ediane SilvaGiselle MedinaJames ZhuNational ProgramCyril Gay致谢!答疑时间Douglas.Gladueusda.govCurrent Funding provided by:ASFVGENOMICS.com 所有ASFV蛋白的结构预测团体驱动力,欢迎提出建议在线测序分析