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1、钱 平华中农业大学 教授/博导广西扬翔股份有限公司 兽医总监HP-PRRSV2006当前我国猪病流行情况ASF在中国流行态势 即全国各地,一年四季,点状或局部片状。即全国各地,一年四季,点状或局部片状。即冬季、春节后、雨季集中爆发季节性高峰即冬季、春节后、雨季集中爆发季节性高峰当前国内流行特点u流行毒株多样化u临床症状不明显u非瘟病毒污染广强毒株:基因II型(主流病毒)变异毒:自然弱毒(基因I型弱毒或II型自然变弱的毒株?)SG缺失毒(CD2v/MGF)DG缺失毒(MGF+CD2v)YN毒株?混合感染基因I和II混合?一、当前PEDV流行的现状二、非瘟常态下PED防控新策略汇报内容一、猪流行性
2、腹泻病毒的流行现状u 19711971年,英国:年,英国:PEDPED首首次发生次发生u 19771977年,比利时:首年,比利时:首次分离到病毒,命名次分离到病毒,命名为为PEDV CV777PEDV CV777u -2014年间,欧洲年间,欧洲很少发生很少发生PEDVPEDVu 20102010年新一轮年新一轮PEDPED在亚在亚洲和美洲爆发流行洲和美洲爆发流行PED在中国大流行(2010年-2022年)1984年首次证实PEDV存在,2010年前主要呈地方性流行;2010年底以来,猪流行性腹泻(PED)在中国大规模爆发,并呈现以下特征:高发病率、高死亡率免疫过P
3、EDV疫苗的猪场也未能幸免除了哺乳仔猪,断奶仔猪、育肥猪、母猪均有发病临床表现:高发病率、高死亡率当前流行的猪流行性腹泻的临床症状新生仔猪呕吐、拉乳色、黄色粪便、水样腹泻、脱水、死亡当前流行的仔猪病毒性腹泻的临床症状PEDV与其它腹泻相关病毒混合感染严重p PEDV与轮状病毒的混合感染比例最高p PEDV与PDCoV的共感染情况在增加p 临床上先发生轮状、从而诱发PED的案例比较多PED已呈常态化发病一年四季都有腹泻疫病发生,冬春季节发病率高,但5-9月份也呈常态化发病从腹泻病料中检出率最高的是PEDV(82.1%),RV检出率为1.9%;TGEV检出率为1.1%传染性因素引起腹泻非传染性因素
4、腹泻营养性腹泻:饲料因素应激因素:断奶环境因素:卫生条件差、寒冷、潮湿其他原因病毒:TGEV、PEDV、RV、PDCoV、PPV、PrV、SF等细菌:Ecoli、沙门氏菌寄生虫:球虫其他病原微生物:蛇型螺旋体引起腹泻发生的病因及其复杂性二、非瘟常态下冬季猪流行性腹泻如何防控?服务中心洗消中心检测中心物资总仓中央厨房隔离中心数据管理管道运输A)结构化生物安全:外部服务辅助防控+猪场“铁桶”防控1、外防输入-外部生物安全管控u病猪和带毒猪是主要的传染源u粪口途径由消化道传播u运猪车或是PEDV传播罪魁祸首。uPEDV主要靠接触方式在场间和猪舍间传播。u鸟和鼠:传播途径之一。u黏膜免疫是其主要免疫途
5、径。(1)后备猪培育与驯化活疫苗+灭活疫苗肠道(PEDV)+灭活疫苗活病毒+灭活疫苗70日龄日龄100日龄日龄140-150日龄日龄(2)车辆管控温度(温度()耐受时间耐受时间感染猪数感染猪数71.110min0%(0/4)62.710min25%(1/4)54.410min25%(1/4)37.712 hours50%(2/4)2024 hours25%(1/4)207 days0%(0/4)粪便中PEDV在金属表面(拖车)中存活情况清除有清除有机物机物消毒消毒烘干烘干切断病切断病原传播原传播配套设施:区域车辆洗消中心(洗消烘)、养殖场洗消点和烘房!泡沫清洗消毒药消毒烘干消毒(60,1h)检
6、测(3)四害管控-鸟地面:翻跃围墙;空中:直飞进入;地下:穿越下水管道。下水管道地面地下围墙井盖生产区生产区生产区生产区生活区空中防控策略:实体围墙、挡鼠板、防鼠网、驱鸟器、纱窗、门帘!(4)饲料管控-PEDV传染新途径湖北某猪场的饲料厂PEDV检测结果热粉料工艺:85度5-10分钟扬翔加热工艺流程示意图喂料器制粒机3级调质保持格林冷却烘干一体机缓冲斗 PEDV对温度敏感;80 5分钟失活;70 10分钟失活;60 30分钟不稳定;50 中等稳定2、内防扩散-内部生物安全管控低级别的生物安全LB:没有任何防护(No protection)中等级别的生物安全MB:换鞋,洗手,换衣服(Danish
7、 Entrance)高级别的生物安全HB:洗澡(Shower)产房区消产房区消毒 通 道毒 通 道怀孕区消怀孕区消毒 通 道毒 通 道区域划分、猪、人、物品和粪等的流向(1)内部生物安全PEDV在粪污中的存活时间可达9个月!(2)污道管控:粪道的污染-PEDV传染新途径(3)产房空栏清洗消毒监控u理想的全进全出:u完全清空猪舍u集中、正确的清洗u彻底消毒u完全干燥并有足够时间空栏u检查猪舍和使用新记录单产房空栏清洗消毒监控温度(温度()耐受时间耐受时间感染猪数感染猪数71.110min0%(0/4)62.710min25%(1/4)54.410min25%(1/4)37.712 hours50
8、%(2/4)2024 hours25%(1/4)207 days0%(0/4)粪便中PEDV在金属表面(拖车)中存活情况G5G55252G8G84 4G26G261111G4G43535G9G98484G3G39 9G6G62 2G1G14 4G2G22 2G12G121 1其他其他9 9G4G5G9轮状病毒对理化因素抵抗力较强:室温可存活7个月;耐超声和脂溶剂;60 30分钟可灭活!20212021年临床样品年临床样品PoRVPoRV测序分析情况测序分析情况(204(204份测序样品)份测序样品)B)强化免疫:提升猪群特异性免疫力群体免群体免疫力疫力环境中环境中病毒量病毒量消灭传染源保护易感
9、动物切断传播途径u毒株匹配;疫苗质量u免疫效果;初乳管理l G2群(变异毒株)流行毒株,78.5%(654/833)l G1群(经典毒株)所占比例6.0%(50/833)l S-INDEL毒株(G1群和G2群的重组毒株)所占比例15.5%(129/833)1977-2022年全球年全球PEDV毒株分析毒株分析From GenBank:1977-2022年年3月月u 毒株匹配当前主要流行毒株当前主要流行毒株PEDV流行毒株的变异特征流行毒株在G2群经典毒株在G1群可能是现有疫苗难以提供免疫保护的主要原因Lin et al.,201620212021年临床样品年临床样品PEDVPEDV测序分析情况
10、测序分析情况(133(133份测序样品)份测序样品)PEDVPEDV仍在持续变异,优势毒株发生变化仍在持续变异,优势毒株发生变化PEDVPEDV重组频率重组频率流行性腹泻病毒GIIa型和GIIb型之间交叉保护力差p 免疫免疫GIIbGIIb亚型猪流行性腹泻疫苗的猪群针对亚型猪流行性腹泻疫苗的猪群针对GIIaGIIa亚型的流行性腹泻毒株中和抗体水平较低亚型的流行性腹泻毒株中和抗体水平较低。p 免疫GIIb亚型猪流行性腹泻疫苗(CH/HNPJ/2017)的猪群不能抵抗GIIa亚型的流行性腹泻毒株(CH/HBXT/2018)的攻击,攻毒后5d,75%(3/4)的猪只能够检测到排毒,临床表现为水样腹泻
11、。(X.Liu,et al.2019)p HBXT/2018 GIIap HNPJ/2017 GIIb冠状病毒疫苗灭活和纯化工艺与疫苗质量密切相关u 疫苗质量Viral Entry and Conformation ChangesPre-fusionPost-fusion基于结构的PEDV疫苗设计PEDV蛋白分子表达情况蛋白编号产量(mg/L)蛋白编号 产量(mg/L)蛋白编号 产量(mg/L)野生型S蛋白0.365Ag024 26.8Ag049 23.129Ag002 lowAg025 2.36Ag050 22.858Ag003 lowAg026 lowAg051 13.61Ag004 lo
12、wAg033 52.8Ag052 48.42Ag005 lowAg034 157Ag053lowAg006 lowAg035 206Ag054lowAg007 lowAg036 4.95Ag055lowAg008 lowAg037 4.81Ag056lowAg009 lowAg038 1.52Ag060 lowAg010 lowAg039 40.5Ag061 143.1Ag014 lowAg040 lowAg062 lowAg015 lowAg041 18.445Ag063 lowAg016 1.04Ag042 0.517Ag064 lowAg017 1.57Ag043 2.149Ag065
13、lowAg018 1.1Ag044 33.884Ag066 lowAg019 lowAg045 14.7Ag067 lowAg020 1.38Ag046 39Ag068 lowAg021 lowAg047 21.6Ag069 109.08Ag022 0.724Ag048 68.426Ag070 74.24Ag023 12.6PEDV pre-Fusion SPEDV pre-Fusion SPEDV重组蛋白疫苗抗原筛选通过结构生物学的改良设计,疫苗的产量较野生型提高了近通过结构生物学的改良设计,疫苗的产量较野生型提高了近600倍倍(1g/L);在电镜下在电镜下S蛋白的结构有近蛋白的结构有近90
14、%保持在融合前体状态,具有良好的疫苗应用前景保持在融合前体状态,具有良好的疫苗应用前景。Pre-FusionPost-Fusion基于结构的PEDV疫苗诱导高水平的中和抗体(PEDV 2a毒株),明显优于商品化灭活疫苗!u 免疫效果uPEDV保护需要粘膜免疫反应;u粘膜免疫需要口服给药,并基于在肠腔的IgA抗体,母猪口服诱导持久的肠道免疫力;u乳汁中产生的免疫力可以传递给哺乳仔猪以保护其免受疾病;u冠状病毒疫苗免疫原性不是很好,变异株疫苗是目前市场上较为有效的疫苗;PEDV经胎盘垂直传播经胎盘垂直传播可以从感染PEDV的分娩母猪的脐带、初生仔猪的睾丸中检测并分离到病毒0115DeliveryL
15、actation50100VaccineVaccinePigltet diarrhea Sow diarrhea Goal:Increase neutralizing antibodiesagainst PEDV to protect directly sows(activeimmunity)and piglets(passive immunity).u活疫苗+灭活疫苗+灭活疫苗u灭活疫苗+灭活疫苗80Vaccine腹泻口服+免疫对照组对照组实验组实验组序号栋号死亡头数拉稀死亡头数拉稀比例成活率备注序号栋号死亡头数拉稀死亡头数拉稀比例口服疫苗日期成活率 备注1产房2栋4090%98.08%没有
16、口服疫苗1产房18栋300%1月14日98.50%2产房13栋5085%97.74%2产房19栋200%1月14日98.70%3产房3栋4085%98.39%3产房20栋400%1月14日99.00%4产房14栋1075%99.57%4产房26栋200%1月14日99.10%5产房4栋4080%98.30%5产房25栋300%1月14日98.50%6产房15栋700%97.21%6产房21栋400%1月14日98.40%7产房5栋3065%98.77%小结1、对照组没有口服疫苗,仔猪在14日龄开始拉稀,而实验组口服了疫苗,14日龄后没有出现拉稀;2、对照组仔猪拉稀比例占71%,仔猪没有因拉稀导
17、致死亡,实验组拉稀比例0%,目前已将近断奶没有出现拉稀;3、对照组仔猪拉稀时,母猪也拉稀,共11头,实验组没有出现母猪拉稀;4、实验组1-14日(产前14天)开始口服疫苗,对照组没有口服疫苗;5、总结:口服腹泻弱毒疫苗效果明显,效果好!8产房16栋8560%96.76%9产房6栋6080%97.64%10产房17栋6090%96.92%活疫苗+灭活疫苗免疫乳汁编号乳汁编号ODOD值值/IgA血清编号血清编号ODOD值值/IgG1 10.945 0.945 1 11.101 1.101 2 21.445 1.445 2 20.637 0.637 3 30.739 0.739 3 30.503 0
18、.503 4 40.834 0.834 4 40.812 0.812 5 51.360 1.360 5 50.770 0.770 6 60.392 0.392 7 70.545 0.545 PED-IgA 阳性:阳性:OD值值0.421;阴性:;阴性:OD值值0.421。阳性表示抗体合格。阳性表示抗体合格PED-IgG 阳性:阳性:OD值值0.470;阴性:;阴性:OD值值0.470。阳性表示抗体合格。阳性表示抗体合格Passive immunization(Theil,2014)Delivery01224Colostrum3672Transient MilkMature Milku 初乳管理
19、u 减毒活疫苗可能有用,但是通过细胞传代丧失了产生保护性免疫的能力;u 灭活疫苗保护性免疫差。在活病毒感染或弱毒疫苗接种后,利用最新毒株制备的疫苗重复接种或基因工程疫苗可以增强其免疫保护效果;u 免疫目标:在产前母猪产生分泌型IgA,通过初乳传递给仔猪。IgG免疫?u 通过感染的细胞培养的低毒力PEDV有计划的返饲可以获得长期持久的保护性免疫。可以通过仔猪传代获得纯的肠道培养物(接种后8-15小时收集肠道)。如何提升免疫效果?u后备猪驯化u活疫苗(或者活毒)+灭活疫苗u1胎母猪u活疫苗(可选)+灭活疫苗+灭活疫苗u2胎以上u灭活疫苗+灭活疫苗从粪便中检测到病毒早于腹泻的临床症状一旦发现感染猪,尤其是待产母猪,及时隔离,甚至推迟进产房可采用PEDV、TGEV、PDCoV的多重RT-PCR检测可采用鉴别经典毒株和流行毒株的RT-PCR三种腹泻病毒检测经典PEDV与变异PEDV的鉴别RT-PCRPEDV胶体金试纸条检测C)强化病原监测怀孕母猪PEDV的监测流程猪场腹泻的综合防控生物安全(外部生物安全和内部生物)免疫监测(最好的措施是后备猪驯化(活毒或病料驯化)+灭活疫苗免疫,抗体可以维持9周)生产管理(温度、湿度、干燥度;生产节律,不能后备、1胎和经产母猪混养;周生产、批次生产)冬季腹泻“一场一策”方案:预防、疫情处置、奖罚欢迎批评指正!谢谢!